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利用低噪聲、高速ADC增強(qiáng)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀性能

發(fā)布時(shí)間:2023-09-28 來(lái)源:ADI 責(zé)任編輯:wenwei

【導(dǎo)讀】在許多領(lǐng)域應(yīng)用中,飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(TOF MS)已成為一種至關(guān)重要的儀器,特別是在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的細(xì)菌鑒定中,它具有不可替代的作用。TOF MS的核心是低噪聲、高速模數(shù)轉(zhuǎn)換器(ADC)。本文將闡述TOF MS的基本原理并重點(diǎn)說(shuō)明其關(guān)鍵參數(shù)。本文還分析探討了TOF MS參數(shù)和ADC規(guī)格參數(shù)之間的關(guān)系。使用混合信號(hào)前端(MxFE?) ADC的實(shí)際結(jié)果表明,低噪聲、高速ADC可以大大改善TOF MS的指標(biāo),包括質(zhì)量精度、質(zhì)量分辨率和靈敏度。


TOF MS簡(jiǎn)介


質(zhì)譜測(cè)定(MS)是一種根據(jù)分子量對(duì)樣品中已知/未知分子進(jìn)行量化的分析技術(shù)。先將樣品中的元素和/或分子電離成帶或不帶碎片的氣態(tài)離子,然后在質(zhì)量分析儀中將其分離,這樣就可以通過(guò)質(zhì)譜中的質(zhì)荷比(m/z,或脈沖的位置)及相對(duì)豐度(或脈沖的幅度)來(lái)表征元素和/或分子。


質(zhì)譜儀有三個(gè)主要組件:用于從被測(cè)樣品中產(chǎn)生氣態(tài)離子的離子源,根據(jù)m/z比分離離子的質(zhì)量分析儀,以及用于檢測(cè)離子和每種離子相對(duì)豐度的離子檢測(cè)器。檢測(cè)器輸出經(jīng)過(guò)調(diào)理和數(shù)字化處理后,產(chǎn)生質(zhì)譜。目前有多種質(zhì)量分析器,它們采用完全不同的策略來(lái)分離不同m/z值的離子1。圖1顯示了四極桿和TOF MS的主要模塊。


在TOF MS中,短時(shí)電離事件形成的離子通過(guò)靜電場(chǎng)加速,因此不同m/z的離子具有相同的動(dòng)能,但速度不同。這些離子隨后沿著無(wú)場(chǎng)漂移路徑行進(jìn),并以不同的飛行時(shí)間到達(dá)檢測(cè)器——較輕的離子先于較重的離子到達(dá),如圖2所示。在實(shí)踐中,由于加速區(qū)域中初始空間分布和能量(或速度)的差異,相同m/z的一組離子的飛行時(shí)間會(huì)分布形成一個(gè)窄至幾百皮秒(ps)的脈沖。每個(gè)脈沖是對(duì)應(yīng)于多個(gè)獨(dú)立離子到達(dá)事件的信號(hào)之和,通常由半峰全寬(FWHM)參數(shù)來(lái)表征。


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圖1.四極桿和TOF MS的主要模塊


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圖2.飛行時(shí)間質(zhì)量分析儀圖解


檢測(cè)器(例如微通道板(MCP)檢測(cè)器)檢測(cè)傳入的離子并產(chǎn)生脈沖電流。電流由時(shí)間數(shù)字轉(zhuǎn)換器(TDC)或高速ADC記錄。雖然TDC的速度極快,可以低至幾皮秒,但它用于記錄脈沖幅度的動(dòng)態(tài)范圍有限。高速ADC可以實(shí)現(xiàn)2 GSPS或更高的速度,分辨率可達(dá)10位、12位甚至更多位數(shù),因此可以準(zhǔn)確記錄脈沖的時(shí)序和幅度。我們接下來(lái)將介紹影響TOF MS性能的高速ADC的重要規(guī)格參數(shù)。


TOF MS的應(yīng)用


自20世紀(jì)90年代基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)技術(shù)發(fā)明并商業(yè)化以來(lái),TOF MS引起了人們的廣泛關(guān)注2。MALDI技術(shù)的原理如下:電離基質(zhì)分子(通常是有機(jī)酸),同時(shí)利用數(shù)百皮秒至幾納秒(ns)的紫外線(UV)激光脈沖蒸發(fā)樣品分子。在氣相中,基質(zhì)分子將質(zhì)子傳遞給樣品分子,使樣品分子質(zhì)子化并變成帶電離子。由于基質(zhì)吸收了大部分激光能量,因此樣品中的分子會(huì)保持其完整性,而不會(huì)碎裂或分解,這使MALDI成為生物大分子分析領(lǐng)域備受矚目的電離方法。由于MALDI和TOF MS之間易于耦合、不受限的質(zhì)量范圍、高靈敏度和高吞吐量,TOF MS已成為生物醫(yī)學(xué)研究、藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用的重要工具,這些應(yīng)用中的分析物通常是大分子。


值得注意的是,MALDI TOF MS在臨床細(xì)菌鑒定中發(fā)揮著不可替代的作用,其最快周轉(zhuǎn)時(shí)間為4小時(shí),而常規(guī)技術(shù)或其他新技術(shù)需要72小時(shí)以上3。短周轉(zhuǎn)時(shí)間對(duì)于細(xì)菌感染患者的護(hù)理和治療結(jié)果至關(guān)重要。MALDI TOF MS的其他優(yōu)點(diǎn)包括:樣品制備容易,操作成本低,以及有可能識(shí)別一些稀有細(xì)菌。隨著抗菌素耐藥性對(duì)世界各地的人類健康構(gòu)成重大威脅,將MALDI TOF MS作為即時(shí)檢測(cè)(PoC)設(shè)備是大勢(shì)所趨4。


TOF MS的關(guān)鍵參數(shù)


TOF MS定量分析測(cè)試樣品中不同分析物的能力取決于許多因素,包括樣品電離方法的選擇、用于加速和引導(dǎo)離子進(jìn)入離子檢測(cè)器的電場(chǎng)的配置和時(shí)序特性、檢測(cè)器效率及信號(hào)數(shù)字化。我們的討論僅限于與信號(hào)數(shù)字化相關(guān)的TOF MS關(guān)鍵規(guī)格參數(shù),包括質(zhì)量范圍、質(zhì)量精度、質(zhì)量分辨率、重復(fù)率和靈敏度。


質(zhì)量范圍是樣品中分子的分子量范圍,與加速電壓、飛行管長(zhǎng)度、采樣速率和重復(fù)率等多個(gè)因素有關(guān)。質(zhì)量范圍要求因應(yīng)用而異。例如,MALDI TOF MS進(jìn)行細(xì)菌鑒定的測(cè)量質(zhì)量范圍為2,000 Da至20,000 Da的核糖體標(biāo)記。

質(zhì)量基于飛行時(shí)間來(lái)計(jì)算,因此TOF MS的質(zhì)量精度主要取決于脈沖時(shí)間測(cè)量的精度。實(shí)際上,每個(gè)脈沖的到達(dá)時(shí)間是通過(guò)將脈沖擬合到高斯函數(shù)并找到峰值來(lái)計(jì)算的。ADC采樣速率決定單個(gè)脈沖的采樣數(shù),對(duì)于脈沖擬合至關(guān)重要。


質(zhì)量分辨率衡量光譜中兩個(gè)相鄰脈沖之間最接近的可區(qū)分間隔。它通常被定義為離子質(zhì)量與相應(yīng)質(zhì)量脈沖寬度的比值。脈沖寬度的典型定義是FWHM。脈沖越窄,質(zhì)量分辨率越高,意味著可以更好地區(qū)分分子量相近的兩個(gè)離子包。雖然正交加速和反射器可以顯著提高質(zhì)量分辨率,但ADC采樣速率和噪聲性能也會(huì)影響這一關(guān)鍵規(guī)格。


在TOF MS中,質(zhì)譜是來(lái)自許多次重復(fù)的信號(hào)的總和,而不是僅包括單一過(guò)程(電離、加速和漂移、離子檢測(cè)和數(shù)字化)的單個(gè)瞬態(tài)。更重要的是,對(duì)于包含分子量和濃度不同的多種分子的測(cè)試樣品,單一電離事件可能既不會(huì)產(chǎn)生所有感興趣分子的離子,也不會(huì)產(chǎn)生與其濃度成比例的離子。求和是降低此類采樣誤差并提高信噪比(SNR)的有效且實(shí)用的方法。因此,就信噪比和吞吐量而言,重復(fù)率是TOF MS的一個(gè)重要且實(shí)用的規(guī)格參數(shù)。新型TOF MS可以實(shí)現(xiàn)1 kHz或更快的掃描速度,這意味著每個(gè)瞬態(tài)只需1毫秒(ms)或更短的時(shí)間。提高ADC采樣速率會(huì)縮短每個(gè)瞬態(tài)的持續(xù)時(shí)間,從而實(shí)現(xiàn)更快的重復(fù)率。


TOF MS的靈敏度是指檢測(cè)樣品中最低濃度分子的能力。它由許多因素共同決定,例如:化學(xué)背景噪聲、所有目標(biāo)分子的濃度范圍、檢測(cè)器和ADC的噪聲系數(shù)和動(dòng)態(tài)范圍,以及求和得到最終質(zhì)譜的瞬態(tài)數(shù)量。在實(shí)踐中,系統(tǒng)靈敏度可以通過(guò)識(shí)別瓶頸因素和/或平衡這些因素來(lái)優(yōu)化。


TOF MS的理想ADC規(guī)格要求


低噪聲、高速ADC對(duì)于TOF MS的系統(tǒng)性能至關(guān)重要。如前所述,時(shí)間測(cè)量精度和系統(tǒng)噪聲水平是TOF MS儀器的兩個(gè)重要規(guī)格參數(shù)。系統(tǒng)噪聲水平可以通過(guò)重復(fù)測(cè)量并求和來(lái)變通處理,但時(shí)間測(cè)量的精度由高速ADC的采樣速率和孔徑抖動(dòng)決定??紤]到在采用正交加速和反射器的TOF MS儀器中,脈沖可以窄至幾百皮秒,因此在5 GSPS采樣速率下,單個(gè)脈沖只有幾個(gè)樣本。將樣本擬合到高斯函數(shù)時(shí),每個(gè)樣本對(duì)于找到脈沖峰值都很重要。因此,采樣速率和孔徑抖動(dòng)是值得關(guān)注的ADC規(guī)格參數(shù)。


靈敏度由系統(tǒng)噪聲水平?jīng)Q定,而系統(tǒng)噪聲水平可以通過(guò)重復(fù)測(cè)量并求和來(lái)改善。然而,重復(fù)次數(shù)會(huì)限制儀器的吞吐量。為了以較少的重復(fù)次數(shù)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)靈敏度,ADC的噪聲性能非常重要。人們常常對(duì)ADC的性能存在誤解,認(rèn)為其SNR與其位分辨率成正比。采樣速率為1 GSPS或以上的ADC通常采用流水線架構(gòu),其規(guī)格參數(shù)包括有效位數(shù)(ENOB)和噪聲密度/噪聲系數(shù)/SNR等。然而,流水線型ADC有幾個(gè)缺點(diǎn),包括:降低誤差需要高增益和大帶寬運(yùn)算放大器,電容失配,以及前端采樣保持(S/H)和運(yùn)算放大器的功耗;這些因素都會(huì)產(chǎn)生噪聲,導(dǎo)致其無(wú)法實(shí)現(xiàn)所需的位分辨率5。ENOB取決于輸入頻率和采樣速率,通過(guò)信納比(SNDR)進(jìn)行計(jì)算。例如,12位AD9081在4 GSPS和4500 MHz輸入頻率下具有8位ENOB。ENOB并不是衡量ADC噪聲性能的良好指標(biāo)。噪聲密度更接近實(shí)際噪聲水平,但采用高斯脈沖進(jìn)行基準(zhǔn)測(cè)試可以得到ADC噪聲性能以及TOF MS儀器靈敏度的真實(shí)情況。


低噪聲、高速ADC的基準(zhǔn)測(cè)試


MxFE可智能集成RF ADC、數(shù)模轉(zhuǎn)換器(DAC)、片內(nèi)數(shù)字信號(hào)處理和時(shí)鐘/鎖相環(huán)(PLL),支持多芯片同步。市場(chǎng)上也有僅配備高速ADC的MxFE器件。為了簡(jiǎn)化起見(jiàn),我們的基準(zhǔn)測(cè)試使用了AD9082,其集成了ADC和DAC,如圖3所示。集成DAC用于生成FWHM為0.5 ns的窄高斯脈沖串,其幅度由數(shù)字縮放和外部衰減器組合來(lái)控制。高斯脈沖比用于ADC表征的典型單音信號(hào)更接近質(zhì)譜中的信號(hào)。設(shè)置兩個(gè)ADC通道對(duì)信號(hào)進(jìn)行數(shù)字化處理:CH1針對(duì)通過(guò)改變外部衰減器使之飽和或衰減的各種幅度;CH2作為參考,用于高于90%滿量程(FS)且未飽和的信號(hào)強(qiáng)度。在我們的測(cè)試中,采樣速率為6 GSPS,以便為每個(gè)脈沖提供足夠的樣本。


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圖3.使用AD9082進(jìn)行高速ADC測(cè)試的框圖


我們進(jìn)行了三種類型的測(cè)試:


●   衰減和飽和測(cè)試:CH2以固定7 dB衰減器對(duì)作為參考;CH1針對(duì)衰減情況使用8 dB、9 dB和10 dB衰減器對(duì),針對(duì)飽和情況使用3 dB和1 dB衰減器對(duì)。

●   最大20 dB衰減的弱信號(hào)測(cè)量:CH2直接連接到DAC輸出作為參考,縮放-16 dBFSC;CH1將10 dB衰減器對(duì)用于<32% FS信號(hào),將20 dB衰減器對(duì)用于<10% FS信號(hào)。

●   噪聲測(cè)量:CH2以固定7 dB衰減器對(duì)作為參考;CH1使用50 Ω端接電阻。


對(duì)于每次測(cè)試,我們采集>10 μs數(shù)據(jù),并重復(fù)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集10次以檢查重現(xiàn)性。我們?cè)贛ATLAB?中基于數(shù)據(jù)繪制曲線并進(jìn)行分析。對(duì)于每種測(cè)試情況,將10次重復(fù)采集數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比并繪制曲線。圖4顯示了測(cè)試中的單個(gè)脈沖,其中CH1比CH2低3 dB。兩個(gè)通道的10次重復(fù)采集很好地重疊,表明數(shù)據(jù)采集具有高重現(xiàn)性。


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圖4.10次重復(fù)采集重疊表明數(shù)據(jù)采集具有高重現(xiàn)性


AD9082 ADC具有過(guò)載保護(hù)電路,如果輸入幅度超過(guò)上限,此電路將會(huì)激活。如果保護(hù)電路被激活,則在脈沖的下降沿通常會(huì)出現(xiàn)恢復(fù)拖尾,從而導(dǎo)致FS處出現(xiàn)峰值削波和恢復(fù)拖尾。較短的恢復(fù)拖尾對(duì)于時(shí)間精度很重要,因此對(duì)于TOF MS的質(zhì)量測(cè)量也很重要。圖5顯示了飽和(最高6 dB)或衰減的五種情況的曲線。對(duì)于6 dB飽和,恢復(fù)拖尾小于0.4 ns,表明保護(hù)電路激活時(shí)恢復(fù)展寬極小。


為了測(cè)試弱輸入下的ADC性能,我們采集了衰減10 dB和20 dB的信號(hào),如圖6所示。信號(hào)的清晰跡線是在10% FS,即衰減20 dB,表明ADC產(chǎn)生的噪聲極小。


對(duì)于ADC本底噪聲,CH1連接了50 Ω端接電阻,而CH2保持在>90% FS,如圖7所示。


我們通過(guò)繪制直方圖并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)分析噪聲數(shù)據(jù),如圖8所示。此情況的標(biāo)準(zhǔn)差為0.0025,表明FS時(shí)的SNR為52 dB。


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圖5.五種測(cè)試情況(飽和或過(guò)度衰減)的重疊狀態(tài)


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圖6.輸入衰減10 dB和20 dB的測(cè)試情況


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圖7.本底噪聲測(cè)量,CH1連接50 Ω端接電阻


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圖8.本底噪聲(CH1,左)和FS信號(hào)(CH2,右)測(cè)量結(jié)果直方圖


為了進(jìn)一步量化時(shí)間測(cè)量精度和噪聲性能,我們對(duì)每個(gè)脈沖進(jìn)行分段,峰值位于一個(gè)30 ns窗口的中心。然后,我們用高斯模型擬合每個(gè)脈沖,以測(cè)量其FWHM。我們使用30 ns窗口中每側(cè)12 ns的數(shù)據(jù)(總共24 ns)作為噪聲計(jì)算的基線。


圖9顯示了輸入為10% FS的測(cè)試情況的完整采集圖,以及使用高斯擬合和分段基線的單個(gè)脈沖放大圖。表1列出了平均值、測(cè)得的FWHM和計(jì)算的SNR。


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圖9.輸入為10% FS的測(cè)試情況下進(jìn)行FWHM和SNR測(cè)量的脈沖和基線分段


表1.輸入為10% FS的測(cè)試情況下測(cè)得的FWHM和SNR

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我們測(cè)量了輸入衰減從1 dB到20 dB的所有測(cè)試情況下的FWHM和SNR。測(cè)試結(jié)果總結(jié)列于表2中。結(jié)果表明,在不同輸入幅度下,時(shí)間測(cè)量準(zhǔn)確,F(xiàn)WHM讀數(shù)一致。


表2.測(cè)得的FWHM和SNR

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討論和總結(jié)


隨著MALDI TOF MS成為臨床微生物實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)手段,以及人們對(duì)適用于個(gè)性化醫(yī)療的蛋白質(zhì)組學(xué)的興趣日益濃厚,在未來(lái)幾十年內(nèi),MALDI TOF MS在醫(yī)療健康領(lǐng)域中的應(yīng)用預(yù)計(jì)將繼續(xù)保持增長(zhǎng)勢(shì)頭。由于其對(duì)各種分子量的分子能夠?qū)崿F(xiàn)無(wú)損分析的優(yōu)勢(shì),TOF MS在生物醫(yī)學(xué)和藥物研發(fā)、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)方面也有廣泛的應(yīng)用。低噪聲、高速ADC具有出色的噪聲性能,采樣速率比當(dāng)前一代TOF MS儀器中的ADC快3至6倍,因而是下一代高性能TOF MS儀器的關(guān)鍵器件。高采樣速率有助于縮短飛行管的長(zhǎng)度,從而減輕真空系統(tǒng)的負(fù)擔(dān),因此可以減小TOF MS儀器的尺寸而不影響性能。更小的尺寸對(duì)于TOF MS的即時(shí)檢測(cè)(PoC)應(yīng)用和各種現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用非常重要。


AD9082的基準(zhǔn)測(cè)試存在局限性,包括:用于創(chuàng)建低幅度輸入(例如1% FS或40 dB衰減)測(cè)試情況的外部衰減器非常有限,阻抗失配導(dǎo)致數(shù)據(jù)中的反射,以及沒(méi)有屏蔽電磁干擾的開(kāi)放空間。測(cè)試情況中報(bào)告的SNR低于實(shí)際值,因?yàn)樵肼曈?jì)算中未消除由阻抗失配引起的基線反射。MxFE評(píng)估板 和圖形用戶界面(GUI)軟件 可用于執(zhí)行更密集的測(cè)試。 根據(jù)詳細(xì)說(shuō)明并配合現(xiàn)場(chǎng)演示,有助于建立客戶評(píng)估系統(tǒng)。在經(jīng)驗(yàn)豐富的應(yīng)用團(tuán)隊(duì)的指導(dǎo)下,使用MxFE樣片進(jìn)行原型設(shè)計(jì)非常容易。


測(cè)得的FWHM和SNR表明MxFE ADC的時(shí)間精度和噪聲性能出色。市場(chǎng)上MxFE的采樣速率最高達(dá)到10 GSPS,支持靈活地設(shè)計(jì)下一代質(zhì)量精度和質(zhì)量分辨率更好、靈敏度更高、尺寸更小的TOF MS。此外,MxFE ADC受到電源、時(shí)鐘和驅(qū)動(dòng)器產(chǎn)品的支持,有助于確保實(shí)現(xiàn)無(wú)縫系統(tǒng)的集成和優(yōu)化。


參考資料


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關(guān)于ADI公司


Analog Devices, Inc. (NASDAQ: ADI)是全球領(lǐng)先的半導(dǎo)體公司,致力于在現(xiàn)實(shí)世界與數(shù)字世界之間架起橋梁,以實(shí)現(xiàn)智能邊緣領(lǐng)域的突破性創(chuàng)新。ADI提供結(jié)合模擬、數(shù)字和軟件技術(shù)的解決方案,推動(dòng)數(shù)字化工廠、汽車和數(shù)字醫(yī)療等領(lǐng)域的持續(xù)發(fā)展,應(yīng)對(duì)氣候變化挑戰(zhàn),并建立人與世界萬(wàn)物的可靠互聯(lián)。ADI公司2022財(cái)年收入超過(guò)120億美元,全球員工2.4萬(wàn)余人。攜手全球12.5萬(wàn)家客戶,ADI助力創(chuàng)新者不斷超越一切可能。更多信息,請(qǐng)?jiān)L問(wèn)www.analog.com/cn。


關(guān)于作者


Guixue (Glen) Bu是儀器儀表系統(tǒng)解決方案部的系統(tǒng)設(shè)計(jì)/架構(gòu)工程師,研發(fā)重點(diǎn)是科學(xué)儀器儀表開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。他于2018年9月加入ADI公司。他擁有清華大學(xué)生物工程學(xué)士學(xué)位以及普渡大學(xué)生物工程碩士和博士學(xué)位。



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